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人促黃體激素(LH)ELISA試劑盒,操作程序總結(jié)

更新時(shí)間:2014-07-04      瀏覽次數(shù):1398

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1.    標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。

200ng/L

5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

100ng/L

4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

50ng/L

3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

25ng/L

2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12.5ng/L

1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

 

 

2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣  50µl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液  40µl

 


然后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.    溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置  30   秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6.    加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑  50µl,空白孔除外。

7.    溫育:操作同 3。

8.    洗滌:操作同 5

9.    顯色:每孔先加入顯色劑  A50µl,再加入顯色劑  B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.  測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):