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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒產(chǎn)品說明書

發(fā)布時(shí)間:2018/5/23      瀏覽次數(shù):1480

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferase,GST)試劑盒
分光光度法
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加5 mL 蒸餾水溶解。

產(chǎn)品說明:
GST 是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族,主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST 是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)
的重要組成部分,主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH 的巰基共價(jià)結(jié)合,使親電化合物變
為親水物質(zhì),易于從膽汁或尿液中排泄,達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外
的目的。因此,GST 在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外,因
為GST 具有GSH-Px 活性,亦稱為non-Se GSH-Px,具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)
等的功能。注意,GST 催化的反應(yīng)減少GSH 含量,但是不增加GSSG 含量。
GST 催化GSH 與CDNB 結(jié)合,其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm;通過測(cè)定340nm 波長(zhǎng)
處吸光度上升速率,即可計(jì)算出GST 活性。

自備儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水。

操作步驟:
一、粗酶液提?。?br />1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入
1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500
萬(wàn)細(xì)胞加入1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3 秒,間隔7 秒,總時(shí)間
3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接測(cè)定。

二、測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三放在25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)保溫。
3. 空白管:取1mL 石英比色皿,加入100μL 試劑一,900μL 試劑二和100μL 試劑三,迅速混勻后
于340nm 測(cè)定吸光度變化,記錄10 s 和310 s 吸光度為A1 和A2。
4. 測(cè)定管:取1mL 石英比色皿,加入100μL 上清液,900μL 試劑二和100μL 試劑三,迅速混勻后
于340nm 測(cè)定吸光度變化,記錄10 s 和310 s 吸光度為A3 和A4。

注意:空白管只需測(cè)定一次。

1. 樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行,且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力;
2. 細(xì)胞中GST 活性測(cè)定時(shí),細(xì)胞數(shù)目須在300 萬(wàn)-500 萬(wàn)之間,細(xì)胞中GST 的提取時(shí)可加試劑一
后研磨或超聲波處理,不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞;
3. 本法測(cè)定GST 活性的線性范圍可達(dá)76 μmol/min /L,測(cè)定前先用1~2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如5min
內(nèi)反應(yīng)不成線性,須對(duì)樣品用蒸餾水稀釋,計(jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù);
4. 測(cè)定反映的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響,請(qǐng)控制在25℃或者37℃(哺乳動(dòng)物)。


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