豬活化蛋白 C（APC）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
豬活化蛋白 C（APC）酶聯(lián)免疫分析
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部分 ELISA 簡介
ELISA 是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上
世紀 70 年代初問世 以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用 于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)
域。
ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原
或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗
滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗
原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一
定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)
的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地
放大了免疫反應的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。
第二部分 ELISA 的樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后
當天就進行檢測的樣本，及時儲存在 4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-
20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆谩吮緫苊夥磸蛢鋈凇?br />液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集
上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離
心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再
次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
分）。仔細收集上清。
5. 培養(yǎng)細胞：檢測細胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100
萬/ml 左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。
離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再
次離心。
6. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試
劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上
清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進
行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
8. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。