人β干擾素（IFN-β）ELISA試劑盒的特點。

β干擾素(IFN-β)是一種在抗病毒固有免疫應(yīng)答過程中具有重要作用的細(xì)胞因子,而肝細(xì)胞作為肝炎病毒的宿主細(xì)胞被認(rèn)為具有IFN-β誘生的能力。

選用畢赤酵母GS115為宿主,利用營養(yǎng)缺陷型、抗生素G418和免疫斑點法的組合篩選得到的轉(zhuǎn)化子產(chǎn)量高達(dá)180 mg/L。經(jīng)Western Blot實驗驗證,表達(dá)出的融合蛋白在結(jié)構(gòu)上符合我們的要求。經(jīng)過對菌株的搖瓶表達(dá)條件優(yōu)化,利用有機(jī)培養(yǎng)基,接種、培養(yǎng)至36 h后轉(zhuǎn)入pH6.0、甲醇濃度2%、誘導(dǎo)濃縮比3:1的條件下誘導(dǎo)表達(dá),可得到218 mg/L的表達(dá)量。在5 L發(fā)酵罐的放大試驗中,當(dāng)發(fā)酵至100 h時菌濃和產(chǎn)量均達(dá)到zui高值,菌濃A600為350,表達(dá)量為500 mg/L。經(jīng)過對于融合蛋白IFNβ-HSA的初步純化條件的摸索,對其吸附、解吸附行為的規(guī)律有了進(jìn)一步的了解。進(jìn)而制定了新的純化工藝,經(jīng)過超濾濃縮、染料親和層析、鎳離子螯合親和層析、陰離子交換層析幾步分離得到了純度大于95%的目的蛋白純品,總回收率達(dá)到17%。

人β干擾素（IFN-β）ELISA試劑盒的特點。

與Huh7和HepG2細(xì)胞相比,PH5CH8細(xì)胞經(jīng)NDV與poly(I∶C)誘導(dǎo)可產(chǎn)生高水平的IFN-β。進(jìn)一步利用蛋白免疫印跡法比較3株細(xì)胞系內(nèi)IFN-β誘生信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與PH5CH8細(xì)胞相比,Huh7和HepG2細(xì)胞內(nèi)多種信號蛋白的表達(dá)水平偏低。

人β干擾素-人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HAS)的臨床前研究,本研究采用免疫學(xué)方法對畢赤酵母轉(zhuǎn)化子進(jìn)行篩選,得到高產(chǎn)菌株8株。在5L發(fā)酵罐上對高產(chǎn)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),產(chǎn)量達(dá)500mg/L。發(fā)酵液經(jīng)超濾濃縮、染料親和層析、鎳離子螯合親和層析和DEAE離子交換層析純化后,融合蛋白純度達(dá)到96%。Westernblotting雜交表明融合蛋白具有人血清白蛋白和人β干擾素的抗原性,細(xì)胞病變抑制法測定IFNβ-HSA比活性為1.96×107IU/mg。建立了融合蛋白的生物試劑工藝,為IFNβ-HSA的臨床前研究奠定了基礎(chǔ)。

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人β干擾素（IFN-β）ELISA試劑盒的特點。