HRP標記羊抗鼠IgG3使用方法

一、 試劑成分：

HRP* Polyclonal Goat Anti-Mouse IgG3、50%甘油、PBS、穩(wěn)定劑、保護劑。

二、 使用方法：

ELISA法建議在1：1000-2000選擇合適您實驗的稀釋比例，也可根據(jù)您的具體情況在此建議的稀釋度范圍之外合適的使用。本酶標抗體僅對小鼠IgG3 反應，特異性*。稀釋推薦使用含0.2% BSA（或10%牛血清）和0.1% 吐溫-20的0.01M的PBS（PH：7.0），也可使用其它正確的稀釋用液，原則上配成的工作液要一次使用完，不得多次使用。如確實要多次使用請在配制時加入合適的防腐劑，并要求在2-8℃避光存放，但盡管如此也不要放置太久，以免對您的結果產(chǎn)生不良影響。因不良稀釋用液和存放而造成的損失不在投訴范圍。本品也可以用于免疫印記和免疫組化實驗。

三、注意事項：

1、 雖然本試劑在有效期過后很長一段時間仍可以使用，但還是強烈建議您在管體規(guī)定的有效期內(nèi)正確使用。

2、 請不要在臟亂和強光環(huán)境中取用，以免造成污染和失效。

3、 如果一次使用很少可以將其適當分裝后使用，這樣可以有效的防止試劑污染。                        

四、 批號和有效期：

請查看管體標簽。

五、 保存條件：

-20℃避光保存。

HRP標記抗體的方法
酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可bai用戊二醛二步法和過dian酸鈉法。尤以簡易過dian酸鈉法更為常用。 戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。
2. 標記步驟
(1) 稱取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室溫靜置過夜。 (2) 反應后的酶溶液經(jīng)Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml／1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。 (3) 將待標記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。 (4) 用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續(xù)攪拌3?小時。 (5) 加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時。 (6) 在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃1小時。 (7) 3000rpm離心半小時，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。 (8) 將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4的PB緩沖鹽水透析，去除銨離子后(用萘氏試劑檢測)，10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結合物，分裝后，冰凍保存。