二：保存條件

本試劑盒三個(gè)月內(nèi)使用可4℃儲(chǔ)存，長(zhǎng)期可置-20℃。

三：說(shuō)明

本試劑盒可用于從血液中分離完整而純化的線粒體。

其制備物，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。但不適用于進(jìn)一步DNA提取。

四：操作步驟

1. 血液處理：

血液要求：非肝素鈉抗凝血，使用新鮮血液。對(duì)于陳舊血液，由于凍凝過(guò)程中冰晶已經(jīng)對(duì)細(xì)胞核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以線粒體得率會(huì)大大減少，并且完整性也會(huì)降低。

a. 對(duì)于無(wú)核紅細(xì)胞全血（如哺乳動(dòng)物處周血），取血約5ml（適當(dāng)分成幾管），加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液（稀釋后的工作液,下同），混勻，800 × g  5 min離心收集白細(xì)胞。加入1-2ml紅細(xì)胞裂解液（稀釋后的工作液），吹打重懸白細(xì)胞，合并于一管中，800 × g 5~10 min離心收集白細(xì)胞。此時(shí)如果白細(xì)胞有可見紅色，可再次用少量(0.5ml)紅細(xì)胞裂解液洗細(xì)一次。

b. 對(duì)于有核紅細(xì)胞全血（如禽類全血），取約200-300ul全血，800 × g 5~10 min離心收集全細(xì)胞，用生理鹽水或者PBS清洗兩次，留沉淀去上清。清洗時(shí)請(qǐng)用去尖吸頭吹打。

2. 在收集到的細(xì)胞中，加入1.0 mL冰預(yù)冷的白細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨20~40次；

3. 勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000× g 離心5 min；

4. 取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000× g 再次離心5 min（一共兩次離心，完整去核）。

5．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底；