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上海信帆生物:酶免試劑盒(ELISA試劑盒)的反應(yīng)原理

更新時(shí)間:2015-03-24      瀏覽次數(shù):1577

我們采用的酶:

辣根過(guò)氧化酶(HRP)

1. HRP在蔬菜作物辣根中含量很高。

2. 是一種糖蛋白,含糖量約18%;分子量為44kD。

3. 是一種復(fù)合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結(jié)合 而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。

4. 主酶為無(wú)色糖蛋白,在275nm波長(zhǎng)處有zui高吸收峰;輔基是深 棕色的含鐵卟啉環(huán),在403nm波長(zhǎng)處有zui高吸收峰。

HRP催化下列反應(yīng):

DH2+H2O2<==HRP==>D+2H2O

上式中DH2為供氫體,H2O2為受氫體。HRP對(duì)受氫體的專一 性很高,除H2O2外,僅作用于小分子醇的過(guò)氧化物和尿素的過(guò) 氧化物。后者為固體,作為試劑較H2O2方便。許多化合物可作 為HRP的供氫體,在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺(orthopenylenediamine,OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(3,3', 5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino- bis(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6)]。

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